目前水印蛋在中国南方和北方地区都有发生。根据某公司2016年的调研发现，四川成都超市里销售的6个品牌鸡蛋都存在水印蛋问题，发生率在10%~30%。水印蛋问题是当前商业化蛋鸡养殖场和品牌蛋企业面临的重要难题，但关于水印蛋的问题很少有研究报道。事实上，水印蛋的产生是因为蛋壳内层的形成不完善所导致的，而蛋壳内层的发育受到蛋壳内膜结构的影响，蛋壳的沉积需要蛋壳膜表面的成核点，如果蛋壳内膜发育不完善，蛋壳的形成可能会受到影响。而蛋壳膜的发育和蛋壳的沉积与微量元素有直接的关系（图3）。因此微量元素的缺乏可能会导致蛋壳问题的产生。已有大量研究表明，在饲料中补充微量元素可以改善蛋壳的强度和厚度，但是目前还没有关于微量元素和水印蛋的研究报道。
1、材料与方法
1.1、诺伟司水印蛋评分系统的建立
蛋鸡刚产出的蛋并没有水印，水印蛋是在鸡蛋进入到市场之后的3~5d才逐渐出现的。因此需要找到一个能够量化水印蛋严重程度的方法。诺伟司国际公司技术部通过对水印蛋的结构研究发现，所有出现水印的鸡蛋，在照蛋器下都可以看到透光的斑点（图2），通过近240个水印蛋的照蛋分析发现，只要有暗斑的部位在照蛋器下的透光面积就大，小点状的亮斑在蛋壳上没有暗斑。水印蛋的暗斑和照蛋器下的亮斑成100%的相关性。基于以上基础，诺伟司技术部构建了水印蛋蛋壳评分系统（图4）。
1.2、试验设计
本研究在四川某公司蛋鸡养殖场进行，试验期4周。试验选取1600只34周龄产蛋高峰期蛋鸡，本批蛋鸡所产鸡蛋水印蛋的发生率高达40%以上。试验分为4个处理，每个处理4个重复，每个重复100只蛋鸡。对照组使用该公司蛋鸡日粮（设为基础日粮），其中微量元素均为无机微量元素（硫酸盐），Zn、Cu和Mn分别为80、8、80mg/kg；螯合微量元素组在每吨基础日粮上额外添加125g羟基蛋氨酸螯合锌（20mg/kgZn）和25g羟基蛋氨酸螯合铜（4mg/kg），羟基蛋氨酸螯合锌和铜由诺伟司国际公司提供，同时在基础日粮中减去螯合微量元素中的蛋氨酸123g/t，平衡日粮中的蛋氨酸水平。抗氧化剂组在基础日粮上添加100g/t的爱克多。螯合微量元素+抗氧化剂组在螯合微量元素组日粮基础上添加100g/t的内源性抗氧化剂爱克多，爱克多由诺伟司国际公司提供，同样在基础日粮中减去螯合微量元素中的蛋氨酸123g/t。
1.3、饲养管理
根据该公司蛋鸡养殖标准程序饲养和管理试验蛋鸡，自由采食和饮水。进行日常观察（包括死亡率和淘汰率，并指定具体的处理、笼、日期和数量）、蛋鸡舍温度检测及供料和供水监测。
1.4、观测和检测指标
每天观察2次，记录任何不正常的现象，统计产蛋率、死亡率、发病率、跛脚率、羽毛背秃率、啄羽、啄肛及脱肛等情况。统计每天各重复试验鸡蛋中无壳蛋、破壳蛋（包括裂纹蛋）、软壳蛋及畸形蛋发生数量，计算百分比。非正常鸡及时从试验群中剔除。按重量数记录用于每重复的饲料供应量。根据料槽中剩料量、已记录的料袋中的剩余量，计算饲料剩余量。计算每天产蛋率、日产蛋重及蛋重（按重复数），并计算料蛋比。在试验第4周，分别从每个处理的每个重复随机选取15枚鸡蛋，用于测定蛋壳强度和蛋壳厚度；从每个重复随机抽取30枚鸡蛋，用手机手电筒照蛋（图5），由3个操作人员同时用诺伟司水印蛋评分系统评定水印蛋的严重程度。
所有数据通过SPSS22.00统计软件进行分析，用LSD进行处理间的显著性分析，P<0.05为差异显著，P<0.01为差异极显著。
2、结果与分析
2.1羟基蛋氨酸螯合微量元素和抗氧化剂对蛋鸡生产性能的影响
由表1可知，与对照组相比，各试验组对蛋鸡的生产性能均无显著影响，但是螯合微量元素+抗氧化剂组和抗氧化剂组的蛋鸡产蛋率偏高，抗氧化剂组的料蛋比偏低。
2.2、羟基蛋氨酸螯合微量元素和抗氧化剂对蛋壳质量的影响
由表2可知，羟基蛋氨酸螯合微量元素和抗氧化剂对蛋壳厚度和蛋壳强度影响并不显著。抗氧化剂+螯合微量元素组蛋壳厚度和强度略好于对照组、羟基蛋氨酸螯合微量元素组、抗氧化剂组（P>0.05）。与对照组相比，螯合微量元素组极显著地降低了水印蛋的发生率（P<0.01），也显著低于螯合微量元素+抗氧化剂组和抗氧化剂组（P<0.05）。螯合微量元素和抗氧化剂互作或者抗氧化剂单独添加均可显著降低水印蛋的发生（P<0.05）。试验也发现，虽然畸形蛋的比例很低，但是螯合微量元素组和螯合微量元素+抗氧化剂组与对照组相比显著降低了畸形蛋率（P<0.05）。各组破蛋率无显著差异。
2.3、羟基蛋氨酸螯合微量元素和抗氧化剂对水印蛋评分的影响
由表3可知，在测定的120枚鸡蛋中，螯合微量元素组0分蛋和1分蛋的数量极显著提高，而对照组只有4个0分蛋和12个1分蛋。抗氧化剂添加组也提高了0分蛋和1分蛋的比例，但是和螯合微量元素组相比，3分蛋的发生率近35%，而螯合微量元素组只有11.6%。螯合微量元素和抗氧化剂互作也提高了优质蛋壳的比例，其中0分蛋达到22枚，1分蛋32枚，但没有加性效应。通过诺伟司水印蛋评分发现，对照组评分平均值为2.44，螯合微量元素组最低，为1.43，螯合微量元素+抗氧化剂组为1.70，而抗氧化剂组为1.97。通过诺伟司水印蛋评分可以看出，螯合微量元素极显著降低了水印蛋的发生率（P<0.01），螯合微量元素和抗氧化剂互作也显著降低了水印蛋评分（P<0.05），但是抗氧化剂添加组和对照组相比差异不显著。
3、讨论
本研究通过对水印蛋的照蛋分析发现，凡有水印的蛋壳部分透光程度就很高，说明出现水印的部位蛋壳的致密度低于其他部分。在鸡蛋储存过程中，有空隙部分的蛋壳膜在蛋内部压力下变得较薄，蛋清的水分容易蒸发到空隙中，形成了人们肉眼看到的暗色斑点，这种现象更容易出现在炎热季节。本研究通过水印蛋产生的结构机理创建水印蛋评分体系，这对于研究水印蛋的发生及水印蛋的解决方案提供了一套量化的标准。尽管该标准并不能反映蛋壳的所有问题，但是能够较为客观地评判水印蛋的严重程度。这对于品牌鸡蛋企业具有实际的指导意义。品牌鸡蛋企业可以在打码包装之前，通过照蛋评分，将3分及以上的鸡蛋挑出作为普通鸡蛋销售，降低了在超市里销售期间被退货的风险，这对于企业品牌形象的建立和维护也非常重要。
蛋壳的致密度和矿化程度有关，其中影响蛋壳碳酸钙沉积的除了常规的日粮钙磷水平和维生素水平外，微量元素发挥了很重要的作用。根据蛋壳测定的结果，对照组和试验组在蛋壳厚度和蛋壳强度指标方面没有显著性差异。说明水印蛋的产生可能与钙磷营养没有直接关系，在实际生产中配方师通过提高钙磷水平并不能够降低水印蛋的发生率，而局部的蛋壳致密度不高和蛋壳内膜的功能完整性有重要的相关性。
因为蛋壳膜表面有碳酸钙结晶附着的成核位点，这些位点含有黏多糖和胶原蛋白，这些蛋白的合成与微量元素参与的辅酶活性有关，以锌为辅酶的碳酸酐酶对蛋壳的形成和蛋壳的致密度直接有关，而铜是赖氨酰氧化酶的辅酶，在蛋壳膜胶原蛋白的形成和交联过程中发挥重要作用，缺铜同样可能产生蛋壳质量下降问题。
水印蛋的产生可能与蛋壳形成的初期有关，如果蛋壳形成过程中一部分的蛋壳没有直接附着在蛋壳膜上，这部分会产生搭桥，在蛋壳内部形成比较大的空隙，这些空隙的透光性要高于完整的蛋壳。或者蛋壳膜部分位置的成核位点的碳酸酐酶活性低于正常水平，在蛋壳膜表面钙化结晶过程中，该部位的碳酸钙沉积低于正常部位，从而导致了蛋壳局部位置致密度不高，透光性增加。Bai等研究表明，在蛋鸡饲料中添加20ppm的羟基蛋氨酸螯合锌和4ppm羟基蛋氨酸螯合铜显著提高了蛋壳的强度和厚度。本研究表明，通过在商品饲料中额外添加20mg/kg羟基蛋氨酸螯合锌和4mg/kg羟基蛋氨酸螯合铜极显著地降低了水印蛋的发生率，说明水印蛋的产生可能与蛋鸡机体内微量元素锌和铜的缺乏有关。
由于蛋鸡饲料具有高钙的特性，严重影响无机微量元素的吸收，笔者通过鸡蛋中锌含量的计算，发现蛋鸡每天采食和利用的30%左右锌通过鸡蛋排出。这种长期的高产会导致蛋鸡体内微量元素的流失和缺乏。微量元素锌和铜的缺乏会影响到蛋壳形成过程中碳酸钙的沉积，从而可能导致水印蛋。而羟基蛋氨酸螯合微量元素避免了高钙和植酸等抗营养因子对微量元素的拮抗，有效地补充了蛋鸡锌和铜的不足，从而降低了水印蛋的发生率。
本研究也发现，内源性抗氧化剂爱克多也降低了水印蛋的发生率，这可能和内源性抗氧化剂提高机体代谢水平有关，但目前未找到内源氧化和蛋壳质量的相关研究。但Felver-Gant等研究发现，爱克多可以提高热应激条件下的蛋鸡抗氧化水平，并提高血液中维生素E和维生素A的水平，这可能是爱克多能够降低水印蛋的原因，但有关这方面的推断还需要进一步的研究。在本试验中，在羟基蛋氨酸螯合微量元素组减去123g/t蛋氨酸，以羟基蛋氨酸螯合微量元素中的蛋氨酸作为部分蛋氨酸源，并没有影响到蛋鸡的采食量、蛋重和料蛋比，说明羟基蛋氨酸螯合微量元素中的羟基蛋氨酸具有100%的生物学效价，这和Yi等在肉鸡上的研究结果一致。
4、结论
本试验条件下，添加螯合微量元素和螯合微量元素与抗氧化剂互作均可极显著或显著降低水印蛋的发生率和水印蛋评分，但单独添加抗氧化剂对降低水印蛋的发生率和水印蛋评分的影响不显著。添加螯合微量元素和抗氧化剂试验组对蛋鸡产蛋率、采食量、料蛋比、蛋壳厚度和强度均无显著影响。
（孙得发 中国畜牧杂志）
