山东农业大学赵鹏教授：鸡传染性贫血的危害及其防控

    在信得第四届中国祖代种禽及大型父母代企业技术研讨会上， 山东农业大学动物科技学院赵鹏教授以《鸡传染性贫血的危害及其防控》为主题，向与会行业同仁分享了鸡传染性贫血的危害和防控要点，以下是赵鹏老师的现场分享：
    今天我主要从“鸡传染性贫血病毒的流行与致病性”、“鸡传染性贫血病毒共感染的危害”以及“鸡传染性贫血的防控要点与新措施”三个方面向大家分享《鸡传染性贫血的危害及其防控》。

    一、鸡传染性贫血病毒流行与致病性

    传贫作为典型的鸡免疫抑制病、垂直传播性疾病，既可以水平传播，也可以垂直传播，还可以通过疫苗污染传播。无论垂直传播还是水平传播，传贫的危害都比较严重。我们在通过鸡胚接种的方式模拟传贫垂直传播的五次实验中都发现，有垂直传播的多数SPF鸡群养不到一周便会死掉。此外，一些没有传贫母源抗体或母源抗体很低的鸡，传贫的水平传播危害同样很大。
    传贫发现的历史与疫苗污染也密切相关，它是一种典型的因疫苗污染而被发现的病毒。日本报道给鸡进行疫苗免疫后SPF鸡出现了贫血，由此发现了一个新的病毒，即我们现在说的鸡传染性贫血病毒，此后，在我们国内也发现和报道了活疫苗中的传贫污染。

    传贫之所以能够流行如此广泛，与它超强的传播能力密不可分的。一些科研专家在动物房中的老鼠、猫、狗等动物的粪便里检测到的传贫病毒全基因组与鸡群中的病毒完全一致，这说明传贫的基因组非常稳定保守。很多人说，传贫病毒进来容易送走难，它的传播能力和生存能力超强，这就导致传贫非常难防。

    毫无疑问，传贫在临床上最典型的器官损伤是胸腺萎缩和骨髓黄染。胸腺萎缩，严重时感染鸡的胸腺发育指数大概是正常鸡的的1/4或1/3的水平，如果经垂直传播感染胸腺萎缩会更加严重，可能导致鸡群整个免疫系统的严重损伤甚至崩溃，以致后期各种疫苗免疫效果都不理想。
    我们成功通过反向遗传技术人工构建了山东2015年传贫强毒株SD15株的感染性克隆，这株感染性克隆攻毒后的SPF鸡红细胞压积大约是20或19，一般认为红细胞压积低于27时就属于贫血，那么19-20就应该属于贫血比较严重了。

    近三年，我们也在某痘病毒活疫苗中鉴定到传贫病毒的污染，我们也成功地构建出了这个病毒的反向遗传系统，证实这个毒株具有超强的致病性。在免疫了这个疫苗后，整个鸡群在21天左右出现了严重的贫血，鸡群的生产性能极差，红细胞压积大概在17左右。由此可见，如果疫苗有传贫病毒的污染，疫苗使用效果将被极大抑制。而且，传贫对机体的免疫抑制非常严重，一旦感染传贫，鸡群整个先天免疫水平都会处于很低水平，各种免疫器官萎缩或损伤，影响鸡群健康。

    近年来，传贫流行非常严重，比如有报道显示，从全国17个省份，193个鸡场的调研中发现，某区域的传贫阳性率较高，甚至达到80%左右。很多鸡群中雏鸡传贫病原的阳性率也在逐步提高，而且鸡群的传贫母源抗体不足并具有传贫垂直传播增加的倾向。
    二、鸡传染性贫血病毒共感染的危害

    不同鸡免疫抑制病毒与鸡传染性贫血病毒共感染可能会增强其危害，所以我们要特别关注和提防。

    1.传贫和鸡马立克病共感染对鸡的影响

    ①对细胞压积的影响：通过实验数据我们看到，正常鸡红细胞压积HCT值为29，符合国际普遍27以上的正常标准，传贫单独感染组HCT值是15，但是当传贫和马立克两个共染之后鸡的红细胞压积是8.9，只有正常鸡1/4 左右的水平。我们都知道，红细胞不仅能运输氧还有很强的免疫功能，红细胞压积这么低，鸡的免疫机能也会受影响。虽然鸡到了21日龄有所缓和，但这两种病毒共感染相对于传贫单感染或者鸡马立克单感染以及正常的鸡依然有很大差别。虽然28日龄、35日龄时有所恢复，但仍无法恢复到正常鸡的水平，这就是共感染对红细胞压积也就是贫血的不良影响。
    ②对生长性能的影响。传贫和鸡马立克两种病毒单感染对生产性能有一定的影响，但两种病毒共感染之后影响更大。比如到35日龄时，共感染组鸡相对于正常鸡平均体重相差了约70克，与单感染组相比体重相差了约20克，所以共感染对生产性能的影响非常明显。
    ③对疫苗免疫后抗体的影响。我们评估了传贫感染对四种疫苗免疫的影响，包括新城疫灭活苗，禽流感的 H5和H9以及传染性法氏囊疫苗，毫无疑问共感染组与对照组有显著性差异。对新城疫来讲，正常的鸡是7.32，共感染组是4.45。对H5亚型禽流感疫苗来讲，正常的鸡是7，共感染组是3.8；H9亚型禽流感疫苗正常鸡是6，共感染组是3；法氏囊疫苗正常鸡滴度是2441，共感染组是996。共感染的危害不仅与正常鸡相比差异显著，与单独感染一种病毒的鸡相比，共感染的危害也很明显。
    传贫为什么会导致马立克疫苗免疫失败？它对鸡马立克疫苗免疫有哪些影响？在没有传贫存在的情况下，比如在一次实验中，CVI 988疫苗能够对强毒攻毒提供95%的保护，但一旦有了传贫，它的保护率就降到了54%。另外，传贫还会影响疫苗免疫后鸡的生长性能，免疫CVI988后有传贫病毒的鸡比没有传贫病毒的鸡体重大概差了30克。此外，传贫还影响免疫器官的发育，以胸腺为例，两个组都免CVI 988，但一个组携带传贫，一个组不携带传贫，实验证明，攻毒9天后携带传贫的SPF鸡胸腺发育指数是0.17，不携带传贫的胸腺发育指数是0.39，发育指数值越小说明胸腺萎缩越严重。16天时这种差别更大，携带传贫的胸腺发育指数是0.12，不携带传贫的胸腺发育指数是0.50，也就是说携带传贫病毒感染的鸡胸腺萎缩到正常鸡约1/4的水平。
    2.J亚群禽白血病和传贫共感染对鸡的影响

    ①对生长性能的影响。根据已有的报道和我们的最近研究进展，J亚群禽白血病和传贫共感染对鸡的危害很大。从生长性能来讲，两个病毒共感染后，体重最低的永远是共感染组，体重大概比正常鸡下降30%左右。另外，从7天到63天，监测各种脏器的病毒复制情况来看，当这两个病毒共感染时，一种病毒会促进另一种病毒在免疫器官和脏器中的显著复制。
    ②对疫苗免疫的抑制和禽白血病净化的影响。这两种病毒的混合感染会增强对疫苗免疫的抑制作用。此外，我们通过鸡胚共感染白血病和传贫的模拟实验中证实，共感染后死胚率最高，这就可以解释为什么我们做净化后可以显著提高鸡的孵化率，而携带传贫病毒它的孵化率就很难提高。

    ③对病毒血症的检测和胎粪p27检测的影响。我们检测发现，传贫跟白血病共感染之后，鸡仍然是100%的病毒血症，但对胎粪p27阳性率来讲有一点变化，没有像血液做病毒分离一样有规律。

    ④传贫和白血病通过鸡胚共同垂直传播后对下一代的影响。实验研究发现前两周对整个免疫器官会产生损伤，毫无疑问共感染对脾脏、法氏囊都有一定影响。另外，这两个病毒通过鸡胚垂直传播之后，也会帮助另一个病毒在机体内显著增强复制。
    3.传贫和腺病毒共感染对鸡的影响

    2016 年我国出现安卡拉病后，我戏称传贫和腺病毒是咖啡和伴侣，它们离了谁都不香。比如，我们率先从某新城疫活疫苗中检出传贫和腺病毒的混合污染，花了很大的力气把这两个病毒纯化出来，进行重复模拟实验。最后我们发现，单独污染腺病毒的疫苗使用后并没有像临床上80%那样的死亡率，但同样的腺病毒和同样的剂量，加上传贫混合污染后的疫苗再使用，就出现了高达75%的死亡率，非常切合当时临床实际情况。
    三、鸡传染性贫血防控要点与新措施

    传贫防控的要点——抗体是全世界的共识。几十年来我们通过两种途径来解决抗体的问题，第一是疫苗免疫，第二是自然感染。在很长时间内没有商品化疫苗免疫的情况下，很多企业都是靠自然感染诱导获得抗体。作为一个环境感染压力很高的病毒，传贫在养殖环境中无处不在，要想使它彻底净化，我认为现在的条件下难度很大、净化成本非常高，性价比非常低，暂时还没到那个阶段。

    我们通常通过免疫或自然感染诱导后，再监测种源的传贫抗体滴度、整齐度、离散度，以及监测下一代雏鸡的母源抗体滴度、整齐度、离散度。我们希望抗体滴度越高越好，离散度越低越好。无论用什么方式实现了这个目标，临床上一般不会出现传贫的问题。所以传贫防控的核心一直是让鸡获得足够的高质量的母源抗体，以此挡住传贫的早期感染，如果能挡住早期感染，即使大日龄的鸡再感染也会很容易产生传贫抗体，不容易形成持续性带毒或者垂直传播，从而又容易产生新的抗体，形成新一轮的抗体循环。我们希望母源抗体能在传贫最易感的时期保护鸡群免于感染，以避免长期持续带毒及形成垂直传播的可能性。对于传贫，无论是疫苗免疫还是自然感染诱导，我们希望抗体升上去后在整个产蛋期保持非常平稳的状态。
    我国目前没有注册的商品化国产疫苗，传贫疫苗研制的难点有很多方面，一是我们没有解决好病毒培养体系的问题，二是传贫病毒非常稳定，它不像其他病毒一样随着传代增加而使毒性很快减弱，需要我们强化基础研究加以解决。我们在进行信得转移因子-信必妥对传贫的抑制实验中发现，信得转移因子对抗传贫有一定效果，下面简要介绍一下实验结果。

    抛开抑制病毒感染而言，信得转移因子对生长性能也有促进作用。实验中我们发现，使用了高剂量信得转移因子的实验组鸡群，即便有传贫感染体重仍然能够接近正常SPF鸡的水平。
    信得转移因子之所以能抗病毒，一个重要因素是因为它能够刺激先天抗病毒因素得到有效释放。我们的研究证实，相对于不使用转移因子的SPF鸡，SPF鸡使用转移因子后干扰素、白介素、肿瘤坏死因子等均出现了上调，由此说明，信必妥能够刺激抗病毒先天免疫因素得到有效释放，特别是用了高剂量的转移因子后干扰素呈现了高表达。
    对于可以抗抑制多种病毒的广谱抗病毒蛋白MX蛋白，我们发现使用了信必妥后MX蛋白相对表达水平上调了3倍，我们原来做过的各种免疫增强剂都没能达到这种效果。以前我们的实验数据也表明，一旦 MX蛋白表达后，对戊肝病毒等也有很强的抑制作用。
    信得转移因子对鸡的细胞免疫也有明显促进作用，比如我们观察到信必妥对代表细胞免疫水平的CD4/CD8比值有明显的增加作用，表明促进了细胞免疫水平，而且与香菇多糖联合使用后效果更好。另外，我们观察了转移因子对多种器官发育的影响，包括法氏囊、肝脏、脾脏、胸腺等。我们知道传贫感染后很严重的危害就是导致胸腺萎缩，通过对比发现，使用高剂量的转移因子后，即使感染了传贫强毒，鸡群胸腺的发育基本仍接近于了空白组的水平。
    转移因子对缓解传贫感染的作用非常明显。实验表明，感染传贫的鸡经高剂量转移因子抑制后和正常的鸡红细胞压积几乎没有差别，不仅如此，它还能够抑制传贫在体内的复制。不仅在血液里边，在肝脏、胸腺中信必妥对传贫的复制也有显著的抑制作用。可以说，不管是低日龄还是高日龄，高剂量的转移因子对传贫都有非常明显的抑制作用。