找工作
当前位置:首页 >  畜牧兽医技术 > 正文

新生猪源沙门氏菌耐药性及耐药基因的研究

发布时间:2018-12-25 15:19    作者:.    来源:    查看:
    摘要:目的:研究新生猪源沙门氏菌耐药性及耐药基因。方法:选用改良肉汤半固体培养基、XL74培养基,从150份新生猪源猪肉标本中初筛可疑沙门氏菌,以PCR鉴定沙门氏菌。以K-B法测定新生猪源沙门氏菌的耐药性,并采用PCR扩增技术检测耐药基因。结果:共鉴定出21株新生猪源沙门氏菌,对氯霉素和庆大霉素的敏感性较高,对环丙沙星和链霉素表现为高耐药,耐药基因共5种。结论:新生猪源沙门氏菌耐药现象较为严重。

    1  材料与方法

   (1)材料。菌株来源:2017年6月~2017年10月抽取某养殖场150份新生猪猪肉样品;药敏质控菌沙门氏菌C79-13及阳性对照菌株。试剂:PCR试剂(北京百泰生物技术有限公司),实验所需引物系自主合成,药敏纸片(北京兰博瑞生物技术有限公司),具体包含庆大霉素、复方新诺明、链霉素、环丙沙星、氯霉素、壮观霉素、四环素、诺氟沙星、阿米卡星以及萘啶酸共10种。仪器:DYY-70型号电泳仪、TGL-16G台式离心机、DHP-9048型号恒温培养箱等。

   (2)方法。将采集的150份新生猪猪肉样本逐一置于灭菌袋内,加入培养基共同保存。新生猪猪肉样本保存时间不得超出12小时。

    细菌分离方法。将样本置于含BPW培养液的无菌密封袋内保存,于37℃条件下摇床过夜。第二天,吸取1mLBPW前增菌液至改良肉汤半固体培养基表面,置于42℃恒温箱内持续培养24小时。培养后从培养基中挑取白色可疑菌落,采用三区划线法进行处理,于37℃条件下继续培养24小时。采用PCR鉴定法鉴定疑似沙门氏菌,以Stn的核苷酸序列设引物。

    PCR反应条件为:94℃5min预变性处理,保持温度不变,预变性45s后转为55℃条件,持续退火45s;调整至72℃延伸30s,经过30个循环。最后于72℃条件下持续延伸10min。电泳方法选用琼脂糖凝胶,电泳后回收DNA胶,所得产物用于DNA测序。标本血清型鉴定选用玻片凝集法,新生猪源沙门氏菌的药敏试验采用K-B法进行。

    2  结果

   (1)新生猪源沙门氏菌鉴定结果。本组150份新生猪猪肉样本经改良肉汤半固体培养基、XL74培养基两轮筛选后,分离出24株可疑沙门氏菌(表面可见黑色中心,而且周围可见透明晕环菌落)。经PCR鉴定(Stn基因)及电泳产物回收测序后,确定21株沙门氏菌。新生猪源沙门氏菌的分离率为14.00%。

   (2)新生猪源沙门氏菌的血清型鉴定结果。21株新生猪源沙门氏菌中,共鉴定出6种血清型,其中肠炎沙门氏菌分离率最高,占比25.14%,其他优势血清型包含徳尔卑血清型(21.25%)和里森沙门菌(13.62%)。

   (3)新生猪源沙门氏菌的耐药性。21株新生猪源沙门氏菌的10种抗生素药敏分析结果显示,分离菌对10种抗菌药物的耐药性各不相同:新生猪源沙门氏菌对氯霉素(72.45%)、庆大霉素(68.26%)和壮观霉素(65.28%)的敏感性较高,而对环丙沙星(98.75%)、链霉素(94.23%)和阿米卡星(87.69%)表现为高耐药。其中,3株新生猪源沙门氏菌仅耐1种药物,而18株新生源沙门氏菌耐2种以上抗生素。

   (4)新生猪源沙门氏菌的耐药基因。本组10种耐药基因中,有5种经PCR扩增出相应大小的目的片段。其中,磺胺类耐药基因包含sulII和sulI两种,后者检出率最高,为45.62%;喹诺酮类耐药基因以parC为主,检出率为97.46%;氯霉素耐药基因floR为47.26%。

    3  讨论

    沙门氏菌抗原性复杂,耐药性强,沙门氏菌感染为猪安全养殖及食物污染控制带来诸多不便。为了评估新生猪源沙门氏菌的耐药性及耐药基因,本研究将150份新生猪猪肉标本作为研究对象,结果表明:150份猪肉样本中共分离出21株沙门氏菌,分离率为14.00%。新生猪源沙门氏菌对不同抗生素的耐药程度各不相同,其中高耐药主要包含环丙沙星(98.75%)、链霉素(94.23%)和阿米卡星(87.69%),而3株新生猪源沙门氏菌仅耐1种药物,其余18株新生源沙门氏菌耐2种以上抗生素。这一结果表明新生猪源沙门氏菌的耐药现象较为明显。

    PCR结果显示:磺胺类耐药基因sulII、sulI(45.62%),喹诺酮类耐药基因parC(97.46%),氯霉素floR(47.26%)。通过对耐药性及耐药基因的对比发现,新生猪源沙门氏菌的耐药性与耐药基因存在密切关联。

    4  结论

    综上所述,新生猪源沙门氏菌耐药现象较为明显,而且对环丙沙星、链霉素及阿米卡星的耐药性较高。因此,对新生猪的沙门氏菌感染治疗中应慎用上述抗生素。此外,养殖场应加强沙门氏菌的感染预防,一旦发生感染,应遵循交叉用药原则,避免因抗生素滥用导致沙门氏菌耐药率持续增长。

   (孙代鹏、张宝珠、韩芮、刘福星、郭文洁  沈阳工学院生命工程学院)

如果您认为本网转载的内容涉及侵权,请作品的作者联系网站下方的编辑qq