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LAMP 的特点

发布时间:2012-06-28 06:00    作者:yizhiinfo    来源:畜牧人才网    查看:
冯瑜菲 东北农业大学

    LAMP 与兽医常用的核酸扩增方法相比具有如下优点:

    ⑴使用设备简单。由于 LAMP 反应处于恒定温度的环境下,故只需要一个简单的恒温器,如水浴锅即可,而不需要昂贵的反应仪器,为基层检验检疫部门提供方便。

    ⑵操作简单。LAMP 反应的操作步骤与 PCR 基本相同。但由于所使用的 Bst DNA 聚合酶是一种不耐热的 DNA 聚合酶,因此需要在模板预变性以后再加样。而对于 RNA 的扩增,只需要在反应体系中加入特定的逆转录酶就可以同步进行(RT-LAMP),而不需要特殊的试剂及仪器。

    ⑶灵敏度高。LAMP方法所用扩增模板可低至 10 拷贝或更少,一般能检测到比 PCR 低 10-100 倍的拷贝数,并且基于 LAMP 方法建立的 RNA 分子检测技术 RT-LAMP,其灵敏度也是 RT-PCR 的 100 倍,这对于低浓度的病毒数量或无症状的病毒携带者的检测即具有良好的效果。
    另外,在动物胚胎性别的判断中,基于 LAMP 的动物胚胎性别检测方法具有很高的敏感性和准确性,用 3~5 个细胞样本即可很准确地判断性别,实验表明用 1~2 个细胞的准确性也可达到 75.0%~94.4%。

    ⑷特异性强。由于 LAMP 通过 4 条引物与靶序列上的 6 个特异性部位准确结合来产生扩增,而 6 个区域中任何区域与引物不匹配均不能进行核酸扩增。因此,能获得比 PCR 更高的特异性。

    ⑸扩增效率高。因为不需要预先的双链 DNA 热变性,避免了温度循环而造成的时间损失,整个核酸扩增在 1 h 内即可完成,且产物可扩增至 109倍,达到 0.5mg/ml。若同时使用环引物,则反应时间可以减少 1/3~1/2,通常在 20~30 min 即可检测到扩增产物。

    ⑹耐受性强。Kaneko 等对 LAMP 进行了培养基成分耐受性的研究,发现 LAMP 方法对各种培养基成分具有较强的耐受性,样品可以不进行纯化而直接进行 LAMP 扩增。

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