兽用生物制品是一种特殊商品，如果污染了致病性或潜在诱发致病性危害的微生物，将会给靶动物造成危害从而给养殖户造成巨大损失，因此，为适应市场对猪用弱毒苗的更高要求，笔者认为对其外源病毒的检测除按现行版《中华人民共和国兽药典》的规定严格检测外，还需采用现代分子生物学方法加以检测，以及做更加全面严格的监测，本文就对猪苗生产的主要原辅材料、环节可能造成外源病毒污染的原因进行探讨，以便更好地做出相应的控制措施。
一、猪苗外源病毒的来源分析
由于生产猪用弱毒苗时会使用到各种原辅材料，包括血清、细胞、种毒、胰蛋白酶等，因其来自不同渠道，如控制不力，易受外源因子污染的风险，这里外源因子主要指存在于这些原辅材料的污染物，包括细菌、支原体和病毒等，且通常主要指病毒性外源因子（简称外源病毒），因部分外源病毒可能具有强毒致病性，如污染猪用弱毒苗则可能会引起严重安全后果。
1.血清
目前国产犊牛血清是猪用弱毒细胞苗生产上所用血清的主要来源，根据ATCC（美国菌种中心）的资料介绍，70%以上的胎牛血清受BVDV污染。由于血清来源复杂，往往是由十头至上百头犊牛血清混合成的，且有的还不是均匀混合，造成标签是同一批号，但质量却不相同的现象出现，如犊牛血清中含有BVDV则猪用弱毒苗生产以及其质量必定受到影响。
2.细胞
某些猪用弱毒苗是由牛睾丸细胞或肾细胞来培养病毒，且在整个培养过程都使用犊牛血清及其他一些原材料，这些均会带来包括BVDV在内的外源病毒的污染风险。
3.种毒
种毒在疫苗生产的作用至关重要，在某种程度上它是疫苗内在质量和属性特点的决定因素，如果种毒污染了外源病毒，通过逐级培养放大作用，必然会影响到疫苗的质量。4.胰酶
胰酶是疫苗生产过程中细胞传代、消化所需物料，也是胰蛋白酶产品的原材料，取自羊、猪、牛等动物的胰腺，虽然提取过程对病毒会造成一定损害，但也难免会带上一些外源病毒，这个源头也一样不可忽视。
二、实施的控制要点
1.血清
对生产使用的血清做到每瓶必检，确保血清中无菌、无支原体、无外源病毒污染，尤其是猪瘟疫苗生产用血清除BVDV抗原阴性外还需确保BVDV抗体阴性，且细胞培养无毒性。可采用Co60辐照处理，但需注意剂量，在杀灭外源病毒同时还需兼顾其营养价值。
2.细胞、种毒
2.1 做好细胞、种毒库的建立。它是保证产品质量和确保生产持续性的一项重要工作，也是最基础的工作。细胞、种毒经系列全面鉴定，确定纯粹后作为基础细胞、种毒保存下来，建立基础细胞、种毒库。工作细胞、种毒是从基础细胞、种毒经扩大培养所得，其也需经系列检测，确定纯粹后作为疫苗生产用细胞、种毒，另外，还需对细胞、种毒库制定严格管理制度和操作细则，并分别由专人负责管理和细胞、种毒质量的监控工作。
2.2 做好疫苗接毒培养前，生产细胞培养液的外源病毒检测。生产细胞经培养形成单层后、接入种毒之前，应逐瓶取样混合，做包括BVDV在内的外源病毒检测，以便了解该批细胞的纯净程度。
3. 胰酶
针对疫苗生产时细胞培养用的是15000ml的大转瓶，细胞传代单纯使用螯合剂EDTA溶液消化效果不易掌握，还是需加一定量的胰蛋白酶。所用胰蛋白酶应确保纯净无外源微生物污染。
4. 生产操作环节的控制
4.1 生产场地的要求。生产抗原的班组将取来的工作细胞，在扩大培养为生产细胞时，应在专门操作室进行，而不应在疫苗接毒培养操作室工作，严格区分好各自功能区域。
4.2 人员操作的要求。操作人员应在各自功能区分区操作，在每一工作程序转换时，操作人员均需严格消毒，更换灭菌服等。
总结
猪苗外源病毒的控制是个系统工程，涉及到原辅材料把关、生产环节的质量管控等方面，特别是当前非洲猪瘟存在的大环境情况下，猪苗外源病毒的监控显得尤为重要。国家农业农村部办公厅于2019年2月11日发农牧函[2019]15号«农业农村部办公厅关于切实加强兽用生物制品监督管理严厉打击非法制售使用兽用生物制品等违法行为的通知»中第二条提到要切实加强兽用生物制品生产环节监督管理：包括加强猪源原材料采购使用管理，加强生产过程中生物安全管理，严防非洲猪瘟病毒污染生物制品等，故免受以非洲猪瘟病毒为首的外源病毒污染是当前各生物制品厂家的头等大事。
作者简介：
巫月生：高级兽医师，华南农业大学兽医硕士，现就职于广东永顺生物制药股份有限公司，主要从事质量管理工作；
余玲娜：动物医学专业，现就职于广东永顺生物制药股份有限公司质管部，主要从事非禽源外源病毒和原辅材料的检验工作。
