猪瘟（classicalswinefever,CSF）是由猪瘟病毒（classicalswinefevervirus，CSFV）引起猪的一类具有高度危害性的传染病，国际兽疫局将其确定为A类传染病,也是我国出入境检疫的一类传染病，具有高度接触性、传播快速的临床特点。该病主要流行于亚洲、欧洲、南美洲，是世界养猪业最重要的疫病之一。CSFV是一种单股正链RNA病毒，属于黄病毒科瘟病毒属。目前CSFV的诊断方法有：
1病毒分离
病毒分离是体外检测感染性猪瘟病毒最特异的方法，被认为是确诊猪瘟的“金标准”。病毒可以从组织、全血中分离，但是对于猪瘟的早期诊断，全血或血浆比白细胞更为敏感。最常用于猪瘟病毒分离的细胞为猪肾细胞系（PK15或SK6）或猪睾丸细胞（ST）。虽然病毒分离和鉴定周期长、操作繁琐、对操作者技术要求较高，但在猪瘟爆发时它仍然是对猪瘟进行确诊的必不可少的检测方法。
2血清学诊断
目前最常用的检测猪瘟病毒的血清学方法有病毒中和试验、琼脂扩散试验、补体结合反应试验、间接血凝试验、ELISA、免疫荧光试验，其中酶联免疫吸附试验(ELISA)以其敏感、准确、快速、简单等优点已经成为国内外动物疫病常规的诊断技术，是进行大规模样品检测的优选方法，结合单克隆抗体应用使其具有更大的优势。
1990年Leforban等建立了一种ELISA方法，能够区分BVDV、BDV以及CSFV抗体。这个方法对于BVDV/BDV高流行地区CSFV的检测非常有意义。
2006年刘建文等用纯化的3株CSFV特异性单抗1E2、3B7和4B6直接包被酶标板，然后用纯化兔抗CSFVIgG作为第二抗体建立了AC-ELISA方法，保证了方法的特异性和敏感性，而且操作便捷、省时，易于推广。
3分子生物学诊断
近年来，分子生物学检测技术中PCR技术发展迅速，该技术应用于猪瘟病毒的检测，使猪瘟的检测变得快速、准确，其中有反转录-聚合酶链式反应（reversetran-scrip-tion-polymerasechainreaction,RT-PCR）、巢式PCR（nest-PCR）、荧光定量PCR（FQ-PCR）、多重PCR（Multi-plex-PCR）、环介导等温扩增技术(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)。PCR技术越来越多的应用于CSFV间以及CSFV与其它瘟病毒的检测与鉴别诊断。
2001年Barlic-Maganja等建立了检测并鉴别BVDV和CSFV的单管单酶RT-PCR诊断方法，缩短了检测时间，提高了病毒的检出率。
2006年李艳等人利用猪瘟病毒基因组5′端相对保守，但包含强毒与弱毒的差异性位点，可以作为强毒与弱毒分子鉴别诊断的靶区域，建立了一种能快速区分猪瘟强毒和弱毒的特异而敏感的RT-复合套式PCR（RT-nPCR）分子鉴别诊断方法，可对猪瘟病毒感染进行早期快速准确诊断，从而防止猪瘟感染的蔓延，并及时发现新的猪瘟病毒流行毒株，为制定猪瘟防制策略提供了依据。
2007年朱小甫等根据Shimen株（AF092448）基因序列设计了2对引物，优化了猪瘟病毒（CSFV）的RT-nestedPCR检测方法，并对所优化的RT-nestedPCR特异性进行了检验。经实验检验优化的检测方法灵敏度高，特异性强。
环介导等温扩增方法是日本学者Notomi等在2000年发明的一项恒温核酸扩增新技术,该技术特异性强、灵敏度高、成本低廉、不需要PCR仪，仅需要一个恒温水浴锅即可完成核酸的扩增，特别适合基层部门应用。2009年Chen等利用RT-LAMP、RT-PCR和常规病毒分离方法检测猪瘟疑似病例血液、扁桃体样本中的CSFV，结果CSFV的阳性率分别为89%、78%及71%，与RT-PCR和常规病毒分离方法比较表明RT-LAMP方法具有高度敏感性。
2007年史子学等建立了一种CSFV两步法荧光定量RT-PCR检测方法，参考涵盖CSFV三个基因型的25株CS-FV基因组5′NTR序列设计了一对简并引物和一条Taq-Man探针，引物、探针序列和参考的25株CSFV毒株的相应序列完全匹配。并且所检测的54份阳性CSF临床样品中所含病毒株属于CSFV基因1.1、2.1、2.2、2.3亚型，表明建立的荧光定量RT-PCR方法可以特异的检测较广的CSFV基因。现在荧光定量PCR还没有成为OIE认可的CSFV检测标准方法，但是随着荧光定量RT-PCR方法在CSF临床病料检测方面的不断应用，荧光定量RT-PCR方法将会成为在CSF流行病学调查上使用的可靠方法。
综上所述，病毒分离存在诊断周期长、操作繁琐、检出率低等缺点；常规的血清学试验又都存在一定的血清学交叉反应；抗原抗体反应的检测技术敏感性不够高、检出时间晚，有一定的局限性，荧光定量PCR，敏感性超过病毒分离，特异性略低于病毒分离，经研究人员比较RT-nPCR的检出率最高，表明RT-nPCR是CSFV感染早期诊断的最好方法。可以看出分子生物学技术手段将越来越多的被应用于猪瘟病毒的诊断中。
（山西省太谷县畜牧兽医中心，郝永正）
