新城疫 (ND ) 是由新城疫病毒 (NDV ) 所引起的、禽类一种急性、 烈性传染病, 其主要侵害鸡和火鸡,发病率和死亡率均非常高, 为危害我国养禽业的最严重疾病之一, 该病为世界动物卫生组织 (OIE ) 所规定的 A 类动物疫病,我国将其列为一类动物疫病。 根据毒力不同, NDV 可分为强毒株、 中强毒株及弱毒株 3 类,为了解我省新城疫病毒的分布特点,本研究对我省监测到的 4 株新城疫病毒进行生物学毒力指标的测定。
1 材料与方法
1.1 SPF 鸡胚9~11 日龄的 SPF 鸡胚购置于辽宁益康生物公司。
1.2 实验动物
1日龄无母源抗体雏鸡和 6 周龄非免疫雏公鸡购置于中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。
1.3 MDT (鸡胚平均死亡时间) 的测定
按照 《中华人民共和国兽用生物制品质量标准(2001 年版)规定的标准方法执行。用灭菌 PBS 缓冲液将新收获的各毒株尿囊液作 10 倍递增稀释,取 10-6、 10-7、 10-8三个稀释倍数, 各接种 5 枚 10 日龄鸡胚, 每胚尿囊腔内注射 0.1mL。 接种后每天早晚各照蛋一次, 连续观察 7d, 记录每一鸡胚的死亡时间。鸡胚全部死亡的最高稀释倍数为最小致死量 (MLD ) , 各毒株最小致死量致死鸡胚死亡时间的总和除以死亡鸡胚总数, 所得商即为该毒株的 MDT。
1.4 ICPI (脑内致病指数) 的测定参照新城疫诊
断技术国家标准, 试验地点在中国农业科学院哈尔滨兽医研究所进行。将各含毒尿囊液用灭菌 PBS 缓冲液作 10 倍稀释,分别脑内接种 1 日龄雏鸡 10只, 0.05mL/只, 另取 2 只接种生理盐水作对照, 接种后观察 2 次/d, 记录雏鸡的生长情况, 正常记 0 分,发病记 1 分, 死亡记 2 分, 连续观察 8d。 累记总分除以正常、发病和死亡鸡的累计总数所得的商即为ICPI。
1.5 IVPI (静脉内接种致病指数 ) 的测定
参照新城疫诊断技术国家标准, 试验地点在中国农业科学院哈尔滨兽医研究所进行。 将各含毒尿囊液用灭菌 PBS 缓冲液作 10 倍稀释, 分别静脉接种 6 周龄敏感鸡 10 只,0.1mL/只, 另取 2 只接种生理盐水作对照, 接种后观察2 次/d,记录接种鸡的生长情况,正常记 0 分, 发病记 1 分, 麻痹记 2 分, 死亡记 3 分, 连续观察10d。累记总分除以正常、 发病、麻痹和死亡鸡的累计总数所得的商即为 IVPI。
2结果
2.1 MDT 测定结果CY 株、DD2 株 、 YK 株 和 TL4 株 的MDT 分 别 为 50.6h、 76.3h、62.9h 和 81.3h。
2.2 ICPI的测定结果 CY株的ICPI 值为 1.725、 DD 株的 ICPI值为 1.326、 YK 株的 ICPI 值为1.425、 CY株的ICPI值为1.257。2.3IVPI 的测定结果CY 株的 ICPI 值为 2.34、 DD 株的 ICPI值为 1.49、 YK 株的 ICPI 值为1.89、 TL 株的 ICPI 值为 0.94。
3讨论
致死鸡胚平均时间(MDT)、静脉致病指数 (IVPI ) 和脑内致病指数 (ICPI ) 是测定新城疫毒力的 3 个重要的生物学指标,本研究对检测到的 4 株新城疫病毒进行了生物学毒力测定,结合 3 种生物学毒力测定的结果与 F 基因序列裂解位点综合判定 CY 株为强毒株,其他 3株为中等毒力毒株,本研究为我省制定防控新城疫流行的有效对策提供重要的科学依据。