史小红 四川农业大学
猪巨细胞病毒感染是由猪细胞巨化病毒 (poreineeytomegalovirus,PeMv)引物的一种猪传染病,该病又称为猪包涵体鼻炎 (poreineeytomegalovirus-bodyrhinitis),PCMv属于疙疹病毒科,日疽疹病毒亚科,蔷薇疤疹病毒属,是兽医发现的继猪伪狂犬病病毒后发现的第二个猪疽疹病毒,所以又称为猪疙疹病毒2型。
猪细胞巨化病毒在形态结构上属于一般的双链线状DNA病毒,病毒粒子组成从内到外分别为核蕊、衣壳及囊膜。核蕊常为均匀一致的圆形电子致密区,其形状也有长方形或哑铃状,核蕊直径介于40一75纳米之间。核髓的外围是立体对称的正20面体衣壳,外观呈六角形,核蕊加上衣壳称为核衣壳或裸露的病毒粒子,其直径介于80一110纳米之间。位于病毒粒子最外围的是囊膜,一般是单层,偶尔也出现有双层的情况。在包理和染色等处理过程中,很容易变形,进而导致负染样品中病毒颗粒的直径和外形经常出现不一致的情况,囊膜表面附有纤突,带囊膜的完整病毒颗粒的直径介于120一150纳米之。跟其它疽疹病毒类似,经常也可见到没有核芯或无囊膜的病毒颗粒,电镜观察显示,感染细胞核内仅见包有衣壳的核衣壳,在接近核膜的细胞质小胞体内,可观察到被覆有囊膜的完整病毒粒子。
该病毒感染正常细胞后可使其细胞体积极度增大并达原来体积的6倍,该细胞内的高尔基体、内质网和线粒体、内质网和高尔基体也同样出现肿大,而在超薄切片中可见核内出现巨大的呈结晶体样排列的嗜碱性包涵体。在GeneBank上发布的与PcMV相关的基因序列共有聚合酶 (DPOL)基因序列、糖蛋白gB基因序列和MCP基因序列,其中聚合酶(DPOL)基因序列全长s,024bp、糖蛋白gB基因序列全长分为:58:和:580bp、而McP基因序列全长劣4026bp,将以上基因序列与其它疮疹病毒相对应的序列进行分析发现,PCMV与人疤疹病毒6型或7型的同源性最高。
因PCMV含有囊膜,用乙醚、氯仿等有机溶剂对其处理可使其丧失感染力。PCMV在50℃经30min可失去活性。病毒悬液一60℃下保存2年以上仍有活性,在22℃下24h后的不再具有感染力,但在一30℃下,患病猪鼻豁膜组织的感染力可至少保持5个月。该病毒只在猪肺泡巨细胞培养上能良好地增殖,该细胞适用于对PCMV的分离和感染效价的测定,但由于该细胞经常受到PRSsV和 PCMV在内对的一些病毒的污染,故培养该病毒时必须使用无菌猪或SPF猪等的肺泡巨噬细胞。
此外,用己感染PCMV病毒的猪肾或攀丸直接做细胞带毒培养时,则病毒以感染细胞为中心出现充分增殖,并产生细胞病变。 Bouil1ant等人[31利用输卵管类成纤维细胞探讨PcMv的培养方式、增殖情况以及蚀斑的情况。具体试验结果如下:PCMV在类成纤维细胞的培养方式为:孔板上接种十倍倍比稀释的病毒液,每个稀释度重复两次,31℃培养7天后换液,继续培养14天后去除培养液,使用0.2%EDTA胰蛋白酶液消化细胞后,在倒置显微镜下观察细胞形态。PCMV在类成纤维细胞的增殖情况为:病毒接种的第4天出现感染价,毒价在第10天达最高;接毒后第2天开始有核内荧光抗原出现,7天后消失;此外在接毒后的第3天开始有细胞质内的荧光抗原出现,11天后仍能观察到荧光抗原;感染细胞在接毒后第2天通过HE染色可观察到核内开始出现包涵体,全细胞在第5天后都可见包涵体,合胞体在第11天形成,体积为正常细胞的6倍。
PCMV在类成纤维细胞上形成蚀斑的情况为:将含有中性红的琼脂覆盖在接毒后第11天单层细胞上,第2天即观察到直径为0.2mm左右的红色蚀斑。随时间推移,色素从中心部位开始消失,第21天后形成直径约2mm周边的红色蚀斑。到目前为止对PCMV抗原特性研究得很少,在已报道的文献中TajimaT等人曾通过ELIsA试验对7个国家感染了PcMv患猪的血清进行检测并发现,ChibaZ株与OFI、Hiroshima和ChibaC株存在很大差异,同时oFI株与Hiroshima株之间、ChibaC株与KagawaS株之间也存在差异,而英国的Hiroshima株与ChibaZ、OFZ、ChibaC及B6等株在血清学上也出现不同。综上司一以得出PCMV抗原之间可能存在地区差异。
此外,本病毒与其他疤疹病毒也没有发现有交差反应的现象,进一步揭示该病毒的抗原特异性很强。目前PCMV糖蛋白B已成为学术研究的热点,对己公布的序列进行分析发现该蛋白的序列长度存在2580和2583bp两种。囊膜蛋白gB做为一种必须蛋白,在所有疤疹病毒感染寄主的粘附,穿入,诱导细胞融合和病毒在细胞间的扩散过程中发挥着重要的作用,该蛋白同时具有具有良好的免疫保护性及免疫原性,为治疗和免疫预防猪包涵体鼻炎提供了新路径。