精液品质是公猪繁殖力的一个重要指标，而精子畸形率又是影响精液品质的重要因素之一。有鉴于此，本研究对某规模化猪场15头公猪在不同月份里的精子畸形率进行观察和测定，重点对精子具体的畸形类型进行分析，探索不同类型的精子畸形在全年各月份中的变化趋势。为采取有效措施、提高公猪精液品质提供参考。
1材料与方法
1.1试验材料
1.1.1样品采集2013年1—12月对湖南某猪场的大白、长白和杜洛克共15头公猪每月进行1次精液采集留样，用猪精液稀释液稀释后，滴1滴精液于载玻片的一端，用另一载玻片进行推片，自然干燥，标记公猪耳号和采精时间，放在切片盒内保存备用。公猪舍配备湿帘降温设施，但效果相对不理想。
1.1.2主要仪器、试剂光学生物显微镜（ZEISSprimostar，德国ZEISS公司），高清数字摄像机（MC-D310型，江西凤凰光学集团有限公司），0.5%龙胆紫染色液。其他仪器设备及常规试剂均由湖南农业大学临床兽医学实验室提供。
1.2试验方法
1.2.1精子畸形分类精子畸形一般分5类：原生质滴，头部异常，颈部异常，尾部异常，顶体异常。原生质滴：位于精子头尾交界处，是由于精子的成熟度不够或公猪使用过度造成。头部异常：头部巨大、瘦小、细长、圆形、轮廓不明显、皱缩、缺损、双头等。头部畸形可能是由于细胞分化或精细胞变形过程中某些不良因素的影响而引起。颈部异常：颈部膨大、纤细、曲折、不全、双颈等。尾部异常：弯曲、短小、缺损、双尾等。尾部畸形与精子输出管道如睾丸、输精管的机能障碍有关，如附睾病变，带原生质滴的精子比例上升，还与处理精液的环境有关，如环境温度过低会出现严重的卷尾现象，或精液在运输过程中剧烈震荡，出现较多的无尾精子。顶体异常：顶体不完全、异形。
在生产实践中，种猪的精液要经常检查，畸形精子的百分率应在15％～20％。如果超过这一指标，种猪则不能用于配种或精液废弃。
1.2.2精子畸形的检测精子畸形率的测定通过涂片、染色（龙胆紫染色法）以及镜检等方法来确定。将采集的精液样片用0.5%龙胆紫溶液进行染色、水洗、自然干燥，用40倍物镜进行镜检，对畸形精子进行显微照相，用计算器对不同类型的畸形精子和正常精子分别计数，记录整块样片不同视野500个精子中畸形精子所占的比例。
1.3数据分析
利用Excel进行统计记录，对调查统计的数据利用SPSS18.0软件进行统计学分析，数据以平均值±标准误表示。
2结果与分析
2.1畸形精子图例
对精子涂片进行染色并利用光学显微镜（10×40）观察后，按照正常精子、原生质滴、头部畸形、颈部畸形、尾部畸形进行分类，如图1。
2.2精子各类型畸形率月统计
表1所示，全年15头公猪各月平均精子总畸形率中，8月最高，达（26.33±8.46）%，与1、2、3、6月差异显著（P＜0.05），2月最低，为（8.39±1.02）%，与7、8月差异显著（P＜0.05），其他各月之间差异不显著（P＞0.05）；原生质滴的发生率，8月最高，达（14.26±7.61）%，与1、2月差异极显著（P＜0.01），与除9、12月外的其他各月份差异显著（P＜0.05），2月最低，为（2.21±0.85）%，与8月份差异极显著（P＜0.01）其他各月之间差异不显著（P＞0.05）；尾部畸形率，7月最高，达（13.52±7.45）%，与其余11个月差异显著（P＜0.05），其中与1、2、3以及6月差异极显著（P＜0.01），6月最低，为（3.22±0.69）%，与7月差异极显著（P＜0.01），与其他各月差异不显著（P＞0.05）；头部畸形以及颈部畸形中，各月份之间差异不显著（P＞0.05）。
3讨论
3.1精子畸形率与温度的关系
首先，精子是在阴囊内的睾丸产生的，睾丸内动脉血温不高于35℃，静脉血温更低至33℃，这样使睾丸内的温度相对体腔内的温度要低很多，也只有在这样的低温环境里，精子才能正常产生。
另外，睾丸温度过高影响精子的生长，造成畸形率升高，温度过低时也不利于精子的生长，畸形率同样会升高。
季节性的光周期变化会引起猪内分泌机能产生规律性波动，自动地调节动物的生长过程和生殖机能。猪精液品质的季节性差异显然与光照强度及动物的生殖内分泌状态有关。现存的欧洲野猪保持了夏、秋不繁育后代的特点，其繁殖活动具有明显的季节性。虽然杜洛克、大白、长白等现代瘦肉型猪种经过高度培育和驯化，但其在生殖方面仍然在一定程度上受着“季节性发情”的古老机制影响，因而表现为夏季的精液品质差，尤其是精子畸形率明显高于其他季节。猪的精子发生既有周期性又有连续性。在某一时刻，睾丸内存在着许多分裂阶段或发育状态不同的精细胞，即它们分别处于不同的精子发生周期的某一个阶段，而每一个精细胞都需历经44～45d的精子发生周期才能成为独立的精子，在此过程中，不同品种在不同季节里的精液品质差异不显著。
3.2应激对精子畸形的影响
生精过程是一个十分复杂的细胞增殖和分化过程，同时精子发生受到下丘脑-垂体-性腺轴的调控。环境因素作用于其中任何一个环节，都可导致精子质量下降，但作用部位、作用机制和作用方式尚不清楚。另外，环境因素对健康造成的影响往往由多因素联合作用引起，但目前对于环境因素影响生殖健康的认识远远不够，尚需进一步研究。月份变化中，颈部畸形的精子比例在5月份出现小幅度上升，该时间段气温相对正常，但通过对该场免疫记录显示，4月初5月初分别进行了口蹄疫及蓝耳病疫苗的普免，公猪也在免疫群体中，通过佟敬宾对疫苗应激的研究发现，该类疫苗造成的应激会导致精子畸形率上升。
4结论
在本试验中，种公猪的精子畸形率在夏季普遍升高，显然与高温有关；冬季的精液品质不如春秋季，说明寒冷对精液品质也有较大影响，但影响的强度不及高温大。因此，该场公猪舍做好夏季防暑降温、冬季保温工作是很有必要的。
（湖南农业大学动物医学院，孟晨光，蒋茹，贾欢，吴先潮，申艳辉，袁安文）
