弓形虫病（ｔｏｘｏｐｌａｓｍｏｓｉｓ）是由弓形虫引起的一种人兽共患寄生虫病，呈全球性分布，可在人、牛、绵羊、山羊、猪、鸡、猫等多种动物之间传播，给人类健康和畜牧业发展带来了严重的危害。弓形虫宿主范围广泛，在中间宿主体内虫体形态主要是速殖子和包囊，寄生于各种组织内。鸡作为一种与人类关系非常密切的动物，是弓形虫的一种很重要的中间宿主。因此，掌握鸡弓形虫的感染情况非常重要。国内外目前均有鸡感染弓形虫的研究报道。吕元聪等报道了我国部分地区弓形虫病的流行病学情况，其中鸡弓形虫病的阳性率可达１５．６９％；Ｄｕｂｅｙ等调查了不同国家和地区鸡感染弓形虫的情况，个别地区阳性率居然达到１００％。由此可见，鸡弓形虫病比较普遍。目前，哺乳动物弓形虫病的研究报道比较多，而家禽弓形虫病的研究相对较少，现有的研究大多为流行病学调查。因此，研究鸡弓形虫病的特点，加强鸡弓形虫病的诊断，对于预防人感染弓形虫就具有重要意义。为此，本研究以弓形虫ＧＪＳ株速殖子感染肉鸡，然后观察其感染后的临床症状及组织器官病理变化，从而掌握鸡弓形虫病的特点。
１ 材料与方法
１．１ 虫株来源和弓形虫悬液的制备
弓形虫ＧＪＳ株系本课题组于１９８１年在甘肃省靖远县３头有弓形虫病样症状的成年猪身上分离获得并保种。从液氮中提取冻存的弓形虫ＧＪＳ株速殖子，投入３７～４２℃水浴中迅速溶解，腹腔接种于小白鼠，连续传代转种３次以恢复其活力和毒力。转种３代后，待小白鼠出现各种发病症状时，使用２ｍＬ无菌的ＰＢＳ溶液（ｐＨ ７．２）冲洗感染小白鼠的腹腔，并收集腹腔冲洗液。
１．２ 实验动物
选用１月龄健康黄羽肉鸡，雌雄各半，体重５００ｇ左右，用间接血凝试验（ＩＨＡ）检测其弓形虫感染情况，结果全部为阴性。小鼠：清洁级，体重１８～２２ｇ，由中国农业科学院兰州兽医研究所实验动物场提供。
１．３ 试剂
ＰＶ－９０００通用型二步法免疫组织化学检测试剂盒为北京中杉金桥生物技术有限责任公司产品。甲醛、乙醇、二甲苯、石蜡、伊红、苏木素、树脂等均为国产分析纯。
１．４ 实验动物的感染及观察
随机选取部分健康鸡作为试验组，其他鸡作为空白对照组。试验组每只鸡急性感染弓形虫速殖子约１．５×１０７，并做好标记。每天观察试验组鸡的临床症状，测量其体温，并与对照组进行比较。
１．５ 实验动物的剖杀和组织标本的收集
在不同时间剖杀试验组鸡，观察其内脏的组织病理变化，与对照组比较，并收集每只鸡的心、肝、脾、肺、肾、十二指肠、淋巴结、大脑、法氏囊。
１．６ 组织切片的ＨＥ染色及免疫组织化学检测
组织标本经１００ｍＬ／Ｌ中性福尔马林溶液固定后，石蜡包埋，制备４μｍ厚的切片备用。组织切片用６０℃烘烤３０ｍｉｎ后进行常规ＨＥ染色，然后观察组织病理变化特点；切片脱蜡后，以家兔抗弓形虫ＧＪＳ株阳性血清为一抗，按照免疫组织化学试剂盒说明书方法，检测组织器官中弓形虫速殖子。
２ 结果
２．１ 临床症状
鸡感染弓形虫后，体温没有明显升高。但随着时间的推移，在攻虫后第７天，８０％的试验鸡出现拉稀，肛门处羽毛上沾满鸡粪（见图１Ａ），并逐渐导致体形消瘦；在攻虫后第１４天，３０％的试验鸡出现厌食，食欲不振，并且出现精神沉郁，嗜睡等症状（见图１Ｂ）；在攻虫后第２１天，２０％的试验鸡出现跛行，脚麻痹，无法正常站立行走（见图１Ｃ）。
２．２ 组织器官观察
将鸡剖杀后观察其组织器官发现，８０％的试验鸡腹腔黏膜增生，整个内脏组织仿佛粘在一起（见图２Ａ）。个别鸡的腹腔中充满淡黄色液体（见图２Ｂ）。肠道有明显出血点，严重时出血点连接成片，并且肠道肿胀，毛细血管充血，有明显炎症反应（见图２Ｃ）。肝肿大，伴随着出血、充血，严重时整个肝呈深红色（见图２Ｄ），有时可见整个肝硬化，表面凹凸不平，有坏死灶，并且肝变得很脆（见图２Ｅ）。肺出血肿大，有明显的炎症反应（见图２Ｆ）。脾充血肿大，具有炎症反应（见图２Ｇ）。淋巴结畸形，肿大，并且表面有出血点（见图２Ｈ）。
２．３ 苏木素－伊红（ＨＥ）染色的组织器官的观察
收集组织器官固定后做成切片，ＨＥ染色后观察发现，与正常肺组织切片（见图３Ａ）相比可见，当肺病变严重时可出现广泛性出血（见图３Ｂ），有些部位也可见灶状出血（见图３Ｃ），许多地方还发现围着管腔的放射状出血（见图３Ｄ）。此外，肺淤血也很常见（见图３Ｅ）。同时，在肺中也发现炎性细胞浸润，主要是淋巴细胞（见图３Ｆ），在小支气管黏膜下发现炎性细胞浸润，并且形成淋巴滤泡（见图３Ｇ）。当病变到一定程度，小支气管旁变实，有大量淋巴细胞浸润（见图３Ｈ）。此外，肝出现淤血，中央静脉旁出现灶状坏死，肝的汇管区周围有炎性细胞浸润，汇管区增大，具有炎症反应。脾出现弥漫性增生，脾小结增生增多，髓窦内充血，髓质内有大量淋巴细胞增生。淋巴结的皮质增生增厚，且已增生到髓质内，与对侧皮质连接成片，出现反应性增生。小肠肠绒毛上端融合，有炎性细胞浸润，其主要为淋巴细胞，在肠道的肠黏膜上有大量嗜酸性细胞浸润。大脑中纤维组织增生，脑细胞减少。
３ 讨论
在本研究中，鸡感染弓形虫后体温并没有明显升高，但病理解剖学观察又发现有很强的炎症反应，这可能是Ｔ淋巴细胞及其他白细胞通过Ｆａｓ依赖和Ｆａｓ非依赖途径被诱导凋亡，使宿主的免疫反应被削弱所致，但具体原因还有待于进一步研究。１月龄鸡感染弓形虫后，出现的临床症状是食欲不振、精神沉郁、跛行、脚麻痹、形体消瘦以及拉稀，但没有出现死亡现象，这可以作为临床诊断鸡弓形虫病的依据。而猪弓形虫病会出现持续高温、精神倦怠、呼吸困难、紫红斑皮肤等症状，与鸡弓形虫病不完全相同，并且病猪出现死亡现象。
试验鸡采用人工感染弓形虫速殖子，对鸡组织大体观察发现，腹腔黏膜增生，并且腹液增多；肝肿大，伴随着出血充血，严重时肝硬化，形成许多坏死灶；肺出血肿大，有明显炎症反应；脾充血肿大；淋巴结出血肿大；胃、肠道肿胀，有明显出血点。由此可见，鸡感染弓形虫后，大体观察出现的器官病变主要在肺、肝、脾、淋巴结、胃和肠道，这与国外的报道相符。猪弓形虫病剖检发现，肺肿大，呈现出粟米状大小的出血点；肝肿大，表面有粟米大的坏死灶；脾明显肿大；淋巴结充血、肿大；肠管呈现出血性炎症。这与鸡弓形虫病的症状相似。
对组织切片进行ＨＥ染色，并利用免疫组织化学检测组织中是否存在弓形虫速殖子。观察发现，肺的病理变化尤为明显，随着时间的推移，病变严重时可出现广泛性出血，并有大量淋巴细胞浸润；肝出现淤血，中央静脉旁出现灶状坏死；脾髓窦内充血，脾小结增生增多；淋巴结的皮质增生增厚，已增生到髓质内，出现反应性增生；小肠黏膜下出现大量嗜酸性细胞浸润；大脑中纤维组织增生，脑细胞减少，出现充血、出血。免疫组织化学检测发现，病变组织器官中都存在弓形虫速殖子，可以证明是弓形虫所导致的器官病变。结果表明，肺、肝、脾、淋巴结、胃、肠道和大脑均有不同程度的病理变化，其中肺的病变最为明显，这在国内外尚未见报道。
综上所述，鸡弓形虫病的临床症状是食欲不振、精神沉郁、跛行、脚麻痹、形体消瘦以及拉稀。鸡感染弓形虫后出现的器官病变主要在肺、肝、脾、胃、肠道、淋巴结和大脑，其中肺的病理变化尤为明显。这与猪弓形虫病的症状相似。相比较而言，猪比鸡对弓形虫更加敏感，这可能是鸡的体温较高，不是弓形虫发育的理想温度，导致鸡对弓形虫的抵抗力较强，但具体原因有待进一步研究。
（中国农业科学院兰州兽医研究所蒲元华，王萌，杨晓宇，张德林）
