中草药作为我国传统的医药品种使用已有数千年历史，有着丰富的药源。目前我国约有12000种药用植物，各地常用的中药已达5000种左右。把各种药材相配伍而形成的方剂，更是数不胜数。中药与西药相比其最大的优势在于，很少有细菌会对中药产生耐药性。细菌引起的家畜疾病经常发生，其耐药性问题已经成为全球关注的热点，因而系统地研究中草药的抑菌活性，进一步开发研究新的抗菌药物，成为越来越多学者关注的目标。本试验旨在筛选出对当地常见病原菌敏感的常见中草药，为临床防治畜禽疾病，降低生产成本，提高生产效益提供依据。
1材料与方法
1.1试验材料
待检药物：鸭脚木皮、木蝴蝶、火炭母、岗梅根、倒扣草（鲜）。对照药物：黄连、黄芩。
药物制备：将中草药加适量水，浸泡1h，煎煮30min，取滤液；再加水适量，煎煮30min，取滤液。合并两次滤液，浓缩至每mL含1g生药，然后灭菌备用。
菌株：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、沙门氏菌，由广东海洋大学微生物实验室提供。把菌种接种在适于生长的培养基内，置于37℃恒温箱中培养24h，待菌种复壮后使用。再取复壮的菌种1环（1个菌株），接种到营养肉汤中，置于37℃恒温箱中培养24h备用。培养基：营养肉汤、营养琼脂。
1.2试验方法
1.2.1药敏试验琼脂平板打孔法。用灭菌棉签蘸取供试菌液，均匀涂布于营养琼脂平板上，然后用直径6mm的琼脂打孔器均匀打孔，每板4孔，去除孔内琼脂并适当封闭孔底。将供试药液加于孔中，以满而不溢为宜并作好标记。置4℃冰箱中作用1小时后取出并置于37℃恒温箱中培养24h，观察结果。结果判定：抑菌圈直径大于15mm为高度敏感，10～15mm为中度敏感，小于10mm为耐药。
1.2.2MIC测定试管倍比稀释法。在营养肉汤中将药物进行一系列（2倍）稀释后定量接种待检菌，37℃培养24h后观察结果。试管的药液浓度比依次为1/10，1/20，1/40，1/80，1/160，1/320，1/640，第8管不加药物为对照组管；每管加入菌液0.05mL，混匀。结果判定为肉眼观察细菌生长状况，以药物最低浓度管中无细菌生长者为该试验菌最低抑菌浓度（MIC）。
1.2.3MBC测定平板培养法。将MIC测定中未生长细菌的管内肉汤接种于营养琼脂平板上，做好标记，37℃培养24小时，观察并记录结果。以仍无细菌生长的管内的药物浓度，为该药的最小杀菌浓度（MBC）。
2结果
2.1药敏试验结果
肉眼观察各种药物的抑菌效果，并量度各抑菌圈的直径大小。结果显示：黄连对除枯草芽孢杆菌外的5种菌都呈高度敏感，对枯草芽孢杆菌不敏感；黄芩对枯草芽孢杆菌不敏感，对蜡样芽孢杆菌呈中度敏感，对其它4种菌均呈高度敏感；大肠杆菌、链球菌对鸭脚木皮、木蝴蝶、火炭母3种草药均呈高度敏感；鸭脚木皮、木蝴蝶、火炭母对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、沙门氏菌均无抑菌作用；岗梅根、倒扣草（鲜）对6种菌均无抑菌作用。详见表1。
2.2MIC测定结果
肉眼观察判断细菌的生长情况，结果显示：黄连对金黄葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌、沙门氏菌、蜡状芽孢杆菌的MIC分别为1/320、1/320、1/320、1/160、1/80；黄芩对金黄葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌、沙门氏菌、蜡状芽孢杆菌的MIC分别为1/40、1/160、1/160、1/80、1/40；鸭脚木皮对链球菌的MIC为1/20，对其它菌无抑菌作用；木蝴蝶对链球菌的MIC为1/10，对其它菌无抑菌作用；火炭母对大肠杆菌、链球菌的MIC分别为1/40、1/80，对其它菌无抑菌作用。由于岗梅根、倒扣草（鲜）均无抑菌作用，而5种中草药均对枯草芽孢杆菌无抑菌作用，因此没有进行MIC测定。详见表2。
2.3MBC测定结果
肉眼观察判断细菌的生长情况，结果表明：黄连对大肠杆菌、链球菌、沙门氏菌、金黄葡萄球菌的MBC分别为1/20、1/40、1/20、1/160，而对蜡状芽孢杆菌无杀菌作用；黄芩对大肠杆菌、链球菌的MBC分别为1/10、1/20，对蜡状芽孢杆菌、沙门氏菌、金黄葡萄球菌均无杀菌作用；鸭脚木皮对链球菌的MBC为1/20；木蝴蝶对链球菌的MBC为1/10；火炭母对大肠杆菌、链球菌的MBC分别为1/40、1/80。根据试管倍比稀释法所测定的MIC，挑出有抑菌作用的继续做MBC，其它则显示为空白。详见表3至表7。
3讨论与总结
实验结果显示火炭母的煎煮液对大肠杆菌、链球菌有较强的抑制作用；鸭脚木皮、木蝴蝶仅对链球菌有抑制作用；岗梅根、倒口草（鲜）对6种细菌均无抑菌作用。经试验对比，得出火炭母、鸭脚木皮、木蝴蝶的抑菌作用均比黄连、黄芩弱。鸭脚木皮、木蝴蝶在琼脂平板打孔实验中，对大肠杆菌和链球菌均呈高度敏感，但在试管倍比稀释法中对大肠杆菌却无明显的抑菌作用。这可能是鸭脚木皮、木蝴蝶的酸性偏高，导致在琼脂平板打孔实验中出现抑菌的现象，但实际没有杀菌作用。本研究结果显示不同中草药对不同细菌表现不同的抑菌作用，我们的研究结果与有关报道一致。
根据山东医学院证明，清热解毒药绝大部分具有抑菌作用，外科药的作用也比较显著，其他如止血药、解表药也有一定抑菌作用，而补养药、安神药极少显抑菌作用。但本试验中岗梅根、倒扣草均属清热解毒药，但其对6种菌均无抑菌作用。可能是由于药物在煎煮前没有完全粉碎，在煎煮后仍有部分成分没有完全释放出来，导致药物浓度偏低，从而影响药物的抑菌性。
根据中国植物志记载，火炭母煎剂在试管内对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、炭疽杆菌、乙型链球菌、白喉杆菌、伤寒杆菌、绿脓杆菌和痢疾杆菌均有较强的抗菌作用。但本试验火炭母的煎煮液对大肠杆菌、链球菌有较强的抑制作用，而对金黄葡萄球菌无抑菌作用。其明确原因还需进一步探讨。同时，对中医来说，中药讲求的是药物的组方配伍，中草药在目前的炮制和使用情况下，单味中草药还难以替代抗生素。何明等发现中药的复方制剂优于单味中药，从而抑菌作用可从复方制剂方面作进一步研究。
（东莞市黄江镇农业技术服务中心，袁婷，张广源）
