许光勇 周海深 徐利 卢纪和 孟庆利 李官兵 李兴元 李爽 苏敬良 任晓明
北京养猪育种中心
北京伟嘉集团创新研究院
中国农业大学动物医学院
北京农学院动物科学技术学院
蓝耳病又称猪繁殖与呼吸障碍综合征 （PRRS ）是由蓝耳病病毒 （PRRSV ） 引起以母猪繁殖障碍、 流产， 产死胎、 木乃伊、 弱仔比例增高， 生长猪呈现呼吸困难、 生长迟缓、 诱导免疫抑制并易继发细菌性呼吸道疾病等为特征。目前是危害养猪业生产的最严重传染病之一，世界动物卫生组织将其列为法定报告B 类传染病， 我国列为二类传染病从 1996 年猪蓝耳病出现在我国开始， 尤其是近几年， 给我国养猪业带来前所未有的困惑，许多蓝耳病阳性猪场的猪群大面积死亡都是直接或间接与蓝耳病有关，感染蓝耳病的猪群特别容易继发细菌性疾病，例如副猪嗜血杆菌、 胸膜肺炎放线杆菌、 链球菌、 多杀性巴氏杆菌、 支原体等。但蓝耳病与伪狂犬病有所不同， 蓝耳病只有持续感染的猪却没有终身带毒的猪，因此建立蓝耳病阴性猪群的技术是可行的。
1猪场背景
北京养猪育种中心 A 种猪场生产成绩位居国内前茅， 每头母猪年提供 22 头出栏猪， 属于蓝耳病稳定场。 85 日龄前猪群蓝耳病保持百分之百阴性状态；140 日龄之后出现部分蓝耳病阳性猪， 但其 S/P 值均在 2.5 以下； 母猪群蓝耳病非常稳定从而确保整个猪场生产稳定。各阶段猪群蓝耳病 S/P 值分布见表 1。北京养猪育种中心中荷种猪场 （暂定为 B 种猪场 ） 2012 年之前生产成绩一直不理想，由于该场猪群为蓝耳病阳性导致每年每头母猪所提供出栏猪数还达不到国内平均水平，因此 2012 年将 B 种猪场进行全部清群， 所有工具弃用或彻底洗刷消毒， 清空后所有猪舍空置干燥 1~3 个月时间， 然后猪舍内所有栏杆等设备喷氢漆一层， 进猪前对整个猪场内、 外环境消毒以待引猪。
2材料与方法
2.1研究对象
300 头 50~70 日龄保育猪由北京养猪育种中心A 种猪场提供， 以及该批种猪所产的后代猪群， 该课题在北京养猪育种中心中荷种猪场完成。
2.2检测用试剂盒
猪繁殖与呼吸综合征病毒 X3 抗体检测试剂盒（批号： 99-40959 B171 ） 和猪伪狂犬病病毒 （PRV ）gpI 抗体检测试剂盒 （批号： 99-09836 GJ838 ） ， 均购自北京爱德士元亨生物科技有限公司。
2.3处理方法
B 种猪场于 2013 年 1 月引入 A 种猪场种猪，2012 年 12 月 （引种前 1 个月 ） 对挑选好的 A 种猪场300 头保育猪采血检测蓝耳病抗体； 2013 年 1 月（引种前 1 周 ）对 300 头保育猪采血检测蓝耳病抗体、 抗原和伪狂犬病野毒 gpI 抗体； B 种猪场引入 A 种猪场种猪隔离 20 d 后， 再次采血检测蓝耳病抗体与抗原；以后全群每月采血 1 次检测蓝耳病抗体， 直至 210 日龄 （5 月 ） ； 产前 1 个月 （9 月 ） 全群采血检测蓝耳病抗体、 抗原和伪狂犬病野毒 gpI 抗体； 产后 15 d 分别对母猪和所产仔猪进行采血检测蓝耳病抗体和伪狂犬病野毒 gpI 抗体 （2014 年 2 月所有母猪全部产完 ） 。ELISA （酶联免疫吸附试验） 检测蓝耳病抗体，具体操作完全按照试剂盒说明书进行，若 S/P 值小于 0.4， 则判为 PRRSV 抗体阴性。ELISA 检测伪狂犬病野毒 gpI 抗体，具体操作完全按照试剂盒说明书进行，若 S/N 值大于 0.7， 则判为 PRV gpI 抗体阴性。提取血样核酸进行 PCR 检测后， 凝胶电泳观察有无阳性条带来判定蓝耳病抗原情况。参考浙江省地方标准 （DB 33/T 822—2011 ） 上游引物 5'-ATGGGCGACAATGTCCCTAAC-3'， 下游引物 5'-GAGCTGAGTATTTTGGGCGTG-3'， 产物目的片段 421 bp 为高致病性蓝耳病病毒， 目的片段 511 bp 为美洲型蓝耳病病毒， 所有步骤均按标准执行。
